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驚訝!離心機在微生物實驗實驗中的地位這麽高

发布时间:2020/12/26 15:58:22??????浏览:

  離心機在微生物实验中得地位多高,可以用这么一句话来说——没用離心機恐怕完成不了实验!

  比如原代細胞的提取,有一個懸浮細胞的分離方法:

  1、将血液、羊水、胸水或腹水等悬液直接转至离心管中,離心機1000rpm/分钟离心5分钟。

  2、去掉上清,离心沉淀用无钙、镁的PBS清洗后離心機1000rpm/分钟离心5分钟。此步重复两次。

  3、用培養基重懸,調整適當細胞濃度後分瓶培養。

  4、如選用懸液中某種細胞,可采用離心後的細胞分層液收獲目的細胞。

  再比如細胞懸液機械裂解後有很多細胞碎片,如何去掉這些碎片呢?我們先來看看各種方法:

  1.采用稀釋法。細胞稀釋後還能增殖,會越來越多,而細胞碎片相應地會越來越少。

  2.還有自然沈降法。細胞要比大多數碎片沈降得快一些::將細胞懸液移到離心管中,等細胞大部分下沈時,可將上液吸棄,再加入培養液懸浮細胞,此方法可反複使用,同時每次可顯微鏡下觀察是否符合你的要求。

  3.低速離心機可以去除碎片,一般700g,5mins

  4.離心的時候,在細胞數足夠的條件下,減少離心時間,如平時5min,1000rpm,改爲3min,1000rpm,去上清,因爲壞死和碎片一般都在上清裏!這樣的操作只需要在孵育前洗滌過程中操作一次就可以了!

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  雖然細胞碎片清除辦法很多,但是你會發現,用離心去除是衆多辦法裏面效率最高的!

  而且植物组织和细胞由于具有纤维素、半纤维素和果胶等物质组成的细胞壁,一般需要用石英砂或玻璃粉和适当的提取液一起研磨的方法或用纤维素酶处理也能达到目的。细菌细胞的破碎比较麻烦,因为整个细菌细胞壁的骨架实际上是一个借共价键连接而成的肽聚糖囊状大分子,非常坚韧。破碎细菌细胞壁的常用方法有超声波破碎,与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理等。组织和细胞破碎后,选择适当的缓冲液把所要的蛋白提取出来。细胞碎片等不溶物用離心機或过滤的方法除去。